1、项目名称

CTC单细胞挑取测序，以揭示耐药性以及转移机制等研究

研究癌肿类别：不限癌种

研究方向：临床应用

合作方式：收费

成果归属要求：共同所有

所需合作单位性质：临床医院

研究目的

CTC在伴随诊断上具有比ctDNA更高的特异性，目前受制于CTC的捕获技术，以及后续染色造成细胞的丢失，CTC单细胞测序在耐药性以及转移机制的研究中有一定的局限。本项目旨在通过安方生物新开发的锥形孔滤膜和微流控芯片技术，分离CTC单细胞，然后进行测序，以揭示耐药性以及转移机制。

研究方法

血浆中存在很多游离DNA（cell-free DNA，cfDNA），包括循环肿瘤DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA）和非肿瘤来源DNA，非肿瘤来源DNA占了cfDNA的绝大部分，使得ctDNA的丰度很低，难以获取准确的肿瘤信息。利用分离的CTC细胞可以排除白细胞的干扰，有效获取肿瘤信息。

在患者治疗的过程中，每两周一次抽血检测，将患者血样通过安方的全自动CTC分离设备进行过滤并预处理，然后通过安方的全自动CTC染色设备，加入瘤标等抗体进行免疫荧光染色，染色完成后，使用自动扫描系统进行扫描分析。通过单细胞显微操作平台挑选出CTC单细胞进行测序，以此来进行耐药性以及转移机制的研究。

研究目标

通过一定数量的患者动态监测，揭示耐药性及转移机制。

研究结果共同发表文章。

技术优势简介

基于传统滤膜的局限性，安方设计制造了一种锥形微孔阵列滤膜。分析表明，这种滤膜相比通用的柱形微孔滤膜具有以下几个优点：一是流体通量的增加或滤膜两端压差的减小，因此可以避免大压强差对捕获细胞的损伤，保证后续细胞培养及分析的进行；二是使白细胞快速的通过，从而极大的减少留在滤膜上的白细胞，并获得高纯度的CTC；三是避免了由于膜两边压强差的变化所导致的目标细胞流失。因此，锥形微孔阵列可提高循环肿瘤细胞的捕获效率及选择性。同时可针对尺寸小的CTC, 可以灵活调整小孔孔径，尽量减少CTC的丢失。血液样本过滤后用单细胞显微操作平台取出肿瘤细胞进行测序。

安方自动化处理设备

入组条件

正在进行治疗的患者，接受每两周一次抽血检测，每次5ml。

合作资金

预算根据入组患者数量决定，双方共同承担。

2、项目名称

基于FISH技术的CTC靶向治疗伴随诊断研究（HER2、ALK）

研究癌肿类别：乳腺癌、肺癌

研究方向：临床应用

合作方式：收费

成果归属要求：共同所有

所需合作单位性质：临床医院

研究目的

CTC在伴随诊断上具有比ctDNA更高的特异性，目前受制于CTC的捕获技术，以及后续染色造成细胞的丢失，CTC-FISH在伴随诊断中的应用受到一定的局限。本项目旨在通过安方生物新开发的锥形孔滤膜和微流控芯片技术，提高CTC-FISH（例如：HER2、ALK）在伴随诊断中的临床效果。

研究方法

目前大多数CTC的FISH检测是将血液离心后取PBMC层，滴加在载玻片上进行的，这种操作方式会造成本来稀有的CTC一定程度的丢失，且杂交需过夜。本项目是利用安方生物的独有的锥形孔滤膜和集成微流控芯片技术，实现CTC的高效富集，以及过滤完成后直接在滤膜上进行FISH检测。此方法可以避免细胞的丢失，并且杂交流程只需3h，大大缩短检测时间。同时采用自动化的处理设备，减少人为因素造成的批次间的差异性。

在患者靶向治疗的过程中，每两周一次抽血检测，将患者血样通过安方的全自动CTC分离设备进行过滤并预处理。然后在滤膜上根据癌症种类在滤膜上加HER2或ALK探针杂交，同时加入瘤标等抗体，杂交完成后，使用自动扫描系统进行扫描分析。通过抗体免疫荧光和FISH结果判定CTC的数量以及探针的阴阳性，以此来动态监测患者的治疗状况。

研究目标

通过一定数量的患者动态监测，验证CTC-FISH在伴随诊断中与疗效的一致性。

研究结果共同发表文章。

技术优势简介

基于传统滤膜的局限性，安方设计制造了一种锥形微孔阵列滤膜。分析表明，这种滤膜相比通用的柱形微孔滤膜具有以下几个优点：一是流体通量的增加或滤膜两端压差的减小，因此可以避免大压强差对捕获细胞的损伤，保证后续细胞培养及分析的进行；二是使白细胞快速的通过，从而极大的减少留在滤膜上的白细胞，并获得高纯度的CTC；三是避免了由于膜两边压强差的变化所导致的目标细胞流失。因此，锥形微孔阵列可提高循环肿瘤细胞的捕获效率及选择性。同时可针对尺寸小的CTC, 可以灵活调整小孔孔径，尽量减少CTC的丢失。

入组条件

正在进行靶向治疗的患者，接受每两周一次抽血检测，每次5ml。

合作资金

预算根据入组患者数量决定，双方共同承担。

3、项目名称

基于PCR技术的CTC靶向治疗伴随诊断研究

研究癌肿类别：肺癌、结直肠癌、肺癌、黑色素瘤

研究方向：临床应用

合作方式：收费

成果归属要求：共同所有

所需合作单位性质：临床医院

研究目的

目前CTC多是通过化学染色、免疫组化和免疫荧光染色进行检测，这些方法会存在一定的假阳性，并且受制于目前的CTC的捕获技术，以及后续染色造成细胞的丢失，在伴随诊断中的应用受到一定的局限。CTC的PCR检测具有较高的灵敏度和特异性，可以在免疫荧光的基础上进行PCR检测，以降低假阳性概率。本项目旨在通过安方生物新开发的锥形孔滤膜和微流控芯片技术，进行CTC的PCR检测，提高CTC在伴随诊断中的临床效果。

研究方法

在患者治疗的过程中，每两周一次抽血检测，将患者血样通过安方的全自动CTC分离设备进行过滤并预处理，然后通过安方的全自动CTC染色设备，加入瘤标等抗体进行免疫荧光染色，染色完成后，使用自动扫描系统进行扫描分析。通过单细胞显微操作平台挑选出CTC单细胞，然后进行PCR检测，更加准确地评价靶向治疗的疗效。

研究目标

基于传统滤膜的局限性，安方设计制造了一种锥形微孔阵列滤膜。分析表明，这种滤膜相比通用的柱形微孔滤膜具有以下几个优点：一是流体通量的增加或滤膜两端压差的减小，因此可以避免大压强差对捕获细胞的损伤，保证后续细胞培养及分析的进行；二是使白细胞快速的通过，从而极大的减少留在滤膜上的白细胞，并获得高纯度的CTC；三是避免了由于膜两边压强差的变化所导致的目标细胞流失。因此，锥形微孔阵列可提高循环肿瘤细胞的捕获效率及选择性。同时可针对尺寸小的CTC, 可以灵活调整小孔孔径，尽量减少CTC的丢失。

技术优势简介

基于传统滤膜的局限性，安方设计制造了一种锥形微孔阵列滤膜。分析表明，这种滤膜相比通用的柱形微孔滤膜具有以下几个优点：一是流体通量的增加或滤膜两端压差的减小，因此可以避免大压强差对捕获细胞的损伤，保证后续细胞培养及分析的进行；二是使白细胞快速的通过，从而极大的减少留在滤膜上的白细胞，并获得高纯度的CTC；三是避免了由于膜两边压强差的变化所导致的目标细胞流失。因此，锥形微孔阵列可提高循环肿瘤细胞的捕获效率及选择性。同时可针对尺寸小的CTC, 可以灵活调整小孔孔径，尽量减少CTC的丢失。

入组条件

正在进行靶向治疗的患者，接受每两周一次抽血检测，每次5ml。

合作资金

预算根据入组患者数量决定，双方共同承担。

4、项目名称

基于免疫荧光半定量的CTC靶向治疗伴随诊断研究（HER2、PD-L1）

研究癌肿类别：乳腺癌、肺癌

研究方向：临床应用

合作方式：收费

成果归属要求：共同所有

所需合作单位性质：临床医院

研究目的

目前免疫荧光方法多是检测治疗前后的CTC数目来作为预后标志物，通过CTC数目的变化实时评价特定治疗的疗效，此方法具有一定的局限性。本项目在免疫荧光法进行CTC计数的基础上，对CTC的荧光强度值进行半定量分析，提高CTC在靶向治疗伴随诊断研究中的准确性。

研究方法

在患者靶向治疗的过程中，每两周一次抽血检测，通过安方生物新开发的锥形孔滤膜和微流控芯片技术，对患者血样进行过滤与免疫荧光染色。在免疫荧光法进行CTC计数的基础上，使用图像处理软件IPP对免疫荧光复合物区域进行分割以及目标区域定位，计算图像的平均灰度作为CTC的荧光强度，计算CTC中抗原的含量，更加准确地评价靶向治疗的疗效。

研究目标

通过一定数量的患者动态监测，验证CTC半定量荧光强度值在伴随诊断中与疗效的一致性。

研究结果共同发表文章。

技术优势简介

基于传统滤膜的局限性，安方设计制造了一种锥形微孔阵列滤膜。分析表明，这种滤膜相比通用的柱形微孔滤膜具有以下几个优点：一是流体通量的增加或滤膜两端压差的减小，因此可以避免大压强差对捕获细胞的损伤，保证后续细胞培养及分析的进行；二是使白细胞快速的通过，从而极大的减少留在滤膜上的白细胞，并获得高纯度的CTC；三是避免了由于膜两边压强差的变化所导致的目标细胞流失。因此，锥形微孔阵列可提高循环肿瘤细胞的捕获效率及选择性。同时可针对尺寸小的CTC, 可以灵活调整小孔孔径，尽量减少CTC的丢失。

入组条件

正在进行靶向治疗的乳腺癌HER2阳性表达和非小细胞肺癌PD-L1阳性表达的患者，接受每两周一次抽血检测，每次5ml。

合作资金

预算根据入组患者数量决定，双方共同承担。

发起单位：广州安方生物科技有限公司

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